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采血卡完整協議
采血卡:
將濕潤的12.5毫米圓盤放入旋轉柱中。 將12.5 mm收集盤用60μl1X洗脫緩衝液潤濕後,使用細尖鑷子將圓盤放入旋轉柱中,將濕潤的圓盤按入旋轉柱孔中
2.Allit全血卡自旋柱含有12.5mm收集盤,用60μl1X洗脫緩衝液潤濕,置於含有60μl1X反應緩衝液的1.5ml收集管中。 旋轉柱 - 收集管組件應在室溫下孵育60分鍾,以使全血成分再水合,以進行有效洗脫。
3.將旋轉柱置於含有60μl1X反應緩衝液的1.5ml收集管中。 移取60μl1X反應緩衝液到1.5 ml收集管的底部,將含有12.5 mm收集盤的旋轉柱放入1.5 ml收集管中,得到如圖4所示的組件。用收集管關閉旋轉柱蓋上並在室溫下孵育組件60分鍾,以徹底潤濕收集盤上的全血樣品。 60分鍾的孵育步驟對於從收集盤獲得高產量的全血成分是至關重要的。
4.用蛋白質微陣列反應全血樣品60分鍾。 將印刷和封閉的蛋白質微陣列基質載玻片(1×25×76mm)置於雜交盒中,並與100μl全血樣品在37℃下以500rpm混合反應60分鍾。 陣列板雜交站強烈推薦用於蛋白質微陣列反應和染色步驟。 在60分鍾反應步驟後,使用PipetteIt TM 8通道高速分配器分配的250μl蛋白質微陣列洗滌緩衝液快速連續洗滌微陣列6次。 在實驗台上牢固地倒置並輕敲雜交盒,以去除殘留的洗滌緩衝液。
5.旋轉3分鍾以收集全血樣品並通過渦旋混合。 將旋轉柱 - 收集管組件放入高速微量離心機中,以14,000 xg離心3分鍾,從收集盤上洗脫全血成分,並進入1.5 ml收集管底部的60μl1X反應緩衝液中。 正確洗脫的全血樣品將顯示為深紅色120μl樣品,如圖5所示.120μl全血樣品應使用中等渦旋混合5秒,以確保洗脫緩衝液,反應緩衝液和全血的正確混合組件。
6.處理並掃描蛋白質微陣列以獲得測試結果。 對於涉及抗體結合的蛋白質微陣列,使用熒光第二試劑以1:5,000稀釋度在37℃下以500rpm混合使用陣列板雜交站將蛋白質微陣列染色60分鍾。在步驟9中。染色後,使用PipetteIt TM 8通道高速分配器分配的250μl蛋白質微陣列洗滌緩衝液快速連續洗滌微陣列6次。 從雜交盒中取出微陣列載玻片,在蒸餾水中浸泡3秒,在微陣列高速離心機中離心幹燥5秒,並使用ArrayitInnoScan?掃描花青5通道中的熒光發射。微陣列掃描儀。 使用Mapix?軟件量化掃描圖像以獲得測試結果。
