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采血卡廠家詮釋從血液樣本中提取DNA
關於DNA如何從血液中提取，下麵由采血卡廠家為大家詮釋如何從血液樣本中提取DNA。首先通過使用低滲緩衝液（碳酸氫銨和氯化銨; Himedia）裂解紅細胞（RBC）來分離來自全血的淋巴細胞，對淋巴細胞具有最小的裂解作用。將三體積的RBC裂解緩衝液加入血液樣品中並通過渦旋混合並徹底倒置5分鍾並以20,00g離心（Eppendorf 5415R）10分鍾。大部分上清液丟棄，留下約1ml以防止細胞損失。向沉澱中加入3體積RBC裂解緩衝液，並將渦旋，翻轉和離心步驟重複2-3次，直至獲得澄清的上清液和幹淨的白色沉澱。 最後一次洗滌後，將上清液完全棄去，將沉澱重懸於500μlPBS中，然後加入400μl細胞裂解緩衝液（10mM Tris-HCl，10mM EDTA，50mM NaCl，10％SDS，pH 7.5）和10μl蛋白酶K（10mg / ml原液; Himedia）。將樣品渦旋以完全溶解沉澱，並在56℃下在水浴（CW-30G; Jeio Tech）中孵育2小時以進行裂解。隨後將等體積的苯酚（用Tris平衡，pH8）加入管中並通過倒置1分鍾充分混合。將管在10,000g （4℃）下離心10分鍾，將含水上層轉移到含有等體積（1：1）苯酚和氯仿：異戊醇（24：1）的新管中。通過倒置將管混合1分鍾並以10,000g （在4℃下）離心10分鍾。 然後將上清液轉移到新管中，加入10μl10mg/ ml RNase A（Fermentas，Thermo Scientific）。
將樣品在37℃下孵育30分鍾，然後加入等體積的氯仿：異戊醇（24：1）並通過將管倒置1分鍾並在10,000g （4℃）下離心10分鍾進行混合。將上清液轉移到新管中，加入兩倍體積的無水乙醇（Merck）並輕輕倒轉幾次並在-20℃下冷卻，然後在10,000g （4℃）下離心20分鍾。棄去上清液，加入250μl70％乙醇，輕輕敲打沉澱，然後以10,000rpm離心10分鍾並輕輕倒出上液。顆粒在層流氣流中風幹，將幹燥的沉澱重懸於50μl無核酸酶的水或1×TE緩衝液中，並在-20℃或-80℃冷凍儲存。
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